体外实验讨论水飞蓟宾对脑胶质瘤体细胞替莫唑胺放化疗敏感度的危害——提升对替莫唑胺敏感度、降低耐药性

2022年3月28日10:11:1521
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体外实验讨论水飞蓟宾对脑胶质瘤体细胞替莫唑胺放化疗敏感度的危害——提升对替莫唑胺敏感度、降低耐药性 。
摘 要:替莫唑胺胶襄恰当食用方法。吉林大学附设盛京医院 张明杰、李少一、刘云会脑胶质瘤是脑部最普遍的癌病,具备生长发育快速、侵蚀性生长发育的特点,在其中胶原纤维母细胞瘤恶变度最大、愈后最烂。替莫唑胺(TMZ)是现在医学上使用比较普遍的脑胶质瘤有机化学治疗法药品,可以明显提升胶原纤维母细胞瘤病患者的生活時间。可是针对胶原纤维母细胞瘤病患者即便采用普外手术摘除并輔助做完术后放射性物质治疗法、有机化学治疗法,做完术后也仅有16个月的均值存活時间。水飞蓟宾是黄酮类木酯素类物质水飞蓟素的关键活力成份,很多年来做为肝部维护药品运用于临床医学。近些年发觉,水飞蓟宾能抑制多种多样癌病繁衍并诱发细胞凋亡,还可以与其它癌症药物造成协同效应,提升有机化学治疗法药品对癌细胞的破坏功效,降低肿瘤干细胞对有机化学治疗法药品的承受病理性。本分析在体外实验中发觉水飞蓟宾可以提升脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺的敏感度,并能降低脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺的承受药品,并讨论水飞蓟宾在反转脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺承受药品中有可能的体制,为脑胶质瘤医治给予新的基本思路和解决方案。原材料和方式药品的配制及药品干涉先将水飞蓟宾和替莫唑胺各自事先融解于DMSO中,于-20℃储存,应用时要DMEM培养液将药品稀释液至终浓度值。协同应采用药品时,先以水飞蓟宾处理两天,除去药品后再添加含替莫唑胺的细胞培养液。细胞培养基及诱发承受药品U87 和U251 脑胶质瘤体细胞在含10%胎牛血清的DMEM 培养液中,规范塑造情况下(37℃、5%CO2)开展塑造。对替莫唑胺承受药品的脑胶质瘤体细胞采用逐渐增长药品含量的方式诱发得到。CCK-8法查验体细胞成活率取对数成长期的脑胶质瘤体细胞,胰酶消化吸收后做成单细胞悬浮液,将体细胞匀称注射于96孔板中,放进恒温箱留宿。待第二天取下96孔板,吸除各孔的细胞培养液后排序投药。药品功效两天后停止塑造,每孔添加10 μl CCK-8,放进塑造箱里孵育1小时后上机操作,于酶标仪测量450 nm光波长时各孔光密度值。试验反复3 次,取平均数测算不一样浓度值下每组体细胞的成活率。Western Blot 法查验目地蛋白质搜集待查验的体细胞,依据试品量添加适量的细胞裂解液,冰面静放裂化15分钟。于4℃超低温离心脱水机中以17000转/分离出来心三十分钟,搜集上清液。测量蛋白质浓度值后以裂化液稀释液调节每组试品浓度值至贴近。电泳原理、转印纸至PVDF膜。5%低脂牛奶封闭式1小时,一抗封闭式、4℃摇床孵育留宿。TTBS 洗膜,以HRP 标识的二抗封闭液(1:2000)室内温度下孵育1 钟头,TTBS洗膜,ECL发亮。应用统计学剖析全部标值以均数±标准偏差表明,选用SPSS13.0统计分析软件对试验信息开展数据分析,小组之间数据信息的较为选用t 检测,以P<0.05表明具备统计学差异。結果替莫唑胺与水飞蓟宾对脑胶质瘤体细胞成活率的危害将差异含量的替莫唑胺及水飞蓟宾各自功效于U87、U251脑胶质瘤体细胞,两天后选用CCK-8 法查验体细胞成活率。数据显示,伴随着药品含量的提升,体细胞成活率随着降低。水飞蓟宾提升替莫唑胺对脑胶质瘤细胞分化抑制效果将U87 和U251 脑胶质瘤体细胞各自以替莫唑胺(50μmol/L,48h)、水飞蓟宾(100 μmol/L,48h)及协同药品处理后,CCK-8法查验体细胞成活率。数据显示,协同药品组的体细胞成活率均明显小于替莫唑胺组(P<0.01)(图1)。历经逐渐诱发创建对替莫唑胺承受药品的U251 脑胶质瘤体细胞(U251-TR),添加不一样含量的替莫唑胺,48 小时后查验体细胞成活率。U251 脑胶质瘤体细胞和承受药品体细胞的IC50 各自为(239.6±12.74)μmol/L 和(747.3±20.16)μmol/L,彼此之间具备统计学差异(P<0.01)。将承受药品体细胞先以水飞蓟宾(100 μmol/L,48h)预处理后,再添加替莫唑胺(100 μmol/L,48h),选用CCK-8法查验体细胞成活率。数据显示,协同药品组的体细胞成活率明显小于替莫唑胺组(P<0.01)(图2)。水飞蓟宾根据调整PI3K/Akt 转录因子和Bcl-2的表述来提升脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺的敏感度在替莫唑胺承受药品体细胞中各自给与替莫唑胺(100μmol/L,48h)、水飞蓟宾(100 μmol/L,48h)及药品协同处理后,选用Western Blot 法查验每组体细胞中Bcl-2、p-Akt和Akt的基因表达水准。数据显示,U251-TR组里Bcl-2的基因表达水准和Akt磷酸化水准明显高过U251 组(P<0.01)。替莫唑胺组里Bcl-2的基因表达水准和Akt 磷酸化水准与U251-TR 组无明显转变(P>0.05),水飞蓟宾组里Bcl-2的基因表达和Akt磷酸化水准较U251-TR组明显降低(P<0.01),协同运用水飞蓟宾和替莫唑胺后,Bcl-2和Akt磷酸化水准进一步降低(P<0.01)。探讨脑胶质瘤体细胞的残余和放化疗与放化疗承受是造成 脑胶质瘤治治疗效果果欠佳的具体基本原理。过去对替莫唑胺承受药品体制的研究发现,O6-羟基鸟嘌呤-DNA 羟基迁移蔓延酶(MGMT)阳性者对替莫唑胺治疗效果不佳。可是在进一步的分析中发觉,即便MGMT为呈阴性,仍有40%的脑胶质瘤表明出替莫唑胺承受药品。这表明脑胶质瘤对替莫唑胺承受药品的体制是非常复杂的,除MGMT以外,仍有别的体制参加在其中。近些年研究发现,水飞蓟宾不但可以控制恶性肿瘤繁衍、诱发细胞凋亡,还可以提升肿瘤干细胞对有机化学治疗法药品的敏感度。努里-达洛伊(Noori-Daloii)等报导,水飞蓟宾可以根据抑止多药承受药品遗传基因MDR1、MRP1-7等来推动败血症细胞坏死。萨达瓦(Sadava)等研究发现,水飞蓟宾可以反转人小细胞肺癌对借助泊甙和多柔比星的承受药品。本探究数据显示,水飞蓟宾可以提升脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺的敏感度,并在一定环节上减小了脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺的承受药品。Bcl-2 是至关重要的细胞凋亡控制蛋白质,其过多表述可以促进体细胞防止细胞凋亡的产生。近期研究发现Bcl-2与肉瘤的多药承受药品体制相关,Bcl-2过多体现的肿瘤干细胞主要表现出有机化学治疗法药品的抵御或是承受。阿德姆(Adem)等发觉,滤泡型淋巴肿瘤体细胞中HF28 体细胞对阿昔洛韦和抗BCR蛋白激酶信号转导的细胞凋亡敏感度差,其工作原理与HF28体细胞中Bcl-2的高表述相关。裘(Qiu)等发觉miR-503 可效果于Bcl-2 来调整非小细胞肺癌对顺铂的敏感度。本分析中承受药品细胞的Bcl-2 基因表达水准较对照实验明显升高,提醒Bcl-2参加了脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺的承受药品体制。在承受药品体细胞中运用水飞蓟宾后,Bcl-2的基因表达水准明显降低,而在协同运用水飞蓟宾及替莫唑胺后,Bcl-2的基因表达水准进一步降低,这一结果显示水飞蓟宾可能是根据下降Bcl-2 的表述来反转脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺的承受药品。PI3K/Akt转录因子普遍出现于人体细胞的生理学及病理学主题活动中,对癌病細胞的生存起着非常重要的功效。在消化道恶性肿瘤、前列腺肿瘤、乳腺癌、脑胶质瘤等各种恶性肿瘤中都伴随PI3K/Akt转录因子的过分表述和活性。现阶段的研究表明,PI3K/Akt转录因子可利用危害多药承受药品有关转运蛋白和细胞凋亡蛋白质等方式参加恶性肿瘤多药承受药品的造成。PI3K/Akt转录因子被激话后,白血病细胞K562 中p-gp和MRP1的表述上涨,促使肿瘤干细胞主要表现出有机化学治疗法药品承受。抑止PI3K/Akt转录因子可以下降p-gp、MDR1、MRP1等多药承受药品有关蛋白质,从而反转白血病细胞对有机化学治疗法药品多柔比星的承受药品。有研究表明,抑止PI3K/Akt转录因子可以抑止Bcl-2的表述,进而提升胃癌体细胞对长春新碱的敏感度,诱发细胞凋亡的产生。本探究数据显示,承受药品体细胞中的Akt磷酸化水准明显升高,表明脑胶质瘤体细胞在对TMZ造成承受药品的环节中随着着PI3K/Akt 转录因子的激话。运用水飞蓟宾后,承受药品体细胞对替莫唑胺的敏感度有一定的修复,与此同时Akt磷酸化水准随着降低。在协同运用水飞蓟宾及替莫唑胺后,Akt的磷酸化水准进一步降低。这一結果也表明了水飞蓟宾反转脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺的承受药品全过程可能是根据下降PI3K/Akt转录因子完成的。总的来说,水飞蓟宾可以提升脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺的敏感度,并可以在一定环节上反转脑胶质瘤体细胞对替莫唑胺的承受药品,其体制可能是根据抑止PI3K/Akt数据信号和下降Bcl-2的体现水准来完成,其更进一步的体制尚需进一步科学研究。(文中节选自《现代肿瘤医科学》2016年第12期)药道全世界,助推性命。印度的全世界海淘药店:替莫唑胺使用方法与使用量。

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