米托坦(Lysodren)耐药后的症状表现

2022年10月14日13:47:1427
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米托坦Lysodren)是唯一获得批准用于医治肾上腺皮质癌(ACC)的药品。其临床应用受限于医治时间段重复发的发生。为了研究体外的潜在机制,我们在这里产生了米托坦抗性细胞系。在用 70 μM 米托坦对 HAC-15 人肾上腺皮质癌细胞进行长期脉冲处置后,我们分离了处置细胞和对照的单克隆细胞群,并通过 MTT 测定评估了它们各自的米托坦敏感性。我们进行了外显子组测序和电子显微镜检测,进行了基因表达微阵列分析,并确定了存在和不存在米托坦的细胞内脂质浓度。脉冲处置后建立的克隆细胞系对米托坦具有抗性(IC50为 102.2 ± 7.3 μM (n = 12) 与 39.4 ± 6.2 μM (n = 6) 对照(生物复制,平均值 ± 标准差,P = 0.0001))。与非抗性克隆不同,抗性克隆在米托坦处置时间段保持正常的线粒体和核仁形态。抗性克隆在很大阶段上共享结构和单核苷酸变体,表明共同的起源细胞。耐受药物性部分取决于细胞外脂蛋白,并与细胞内脂质稳态的改变有关,包括游离胆固醇水平以及类固醇产生降低。通过基因表达分析,抗性细胞在包括类固醇代谢和转运、细胞凋亡、细胞生长和 Wnt 讯号传导在内的途径中表现出深刻的改变。这些研究建立了一个ACC中米托坦耐受药物的体外模型,并指出了潜在的分子机制。它们可能使未来的研究可以克服体外耐受药物性并改善体内ACC 医治。

据我们所知,这项研究是第一个在 ACC 中建立米托坦(Lysodren)耐受药物的体外模型以及非耐受药物对照。我们选择 HAC-15 细胞系作为本研究的理想候选者是基于其产生的肾上腺类固醇激素和克隆性。虽然最初被描述为一种新的原发性肾上腺皮质细胞系,但 HAC-15 细胞现如今被认为是最常用的 H295R 肾上腺皮质癌细胞系的克隆亚群。另一种常用的细胞系 SW13可能来源于转移扩散的非肾上腺肿瘤并且由于缺乏类固醇产生而似乎不太有用。两个最近建立的 ACC 细胞系的米托坦敏感性仍有待确定。最近建立的异种移植模型显示米托坦耐受药物性;然而,缺乏非抗性对照阻止了其在本研究中的使用。

HAC-15 细胞系的克隆性、从脉冲处置开始到恢复生长的长时间跨度、获得的米托坦(Lysodren)抗性细胞克隆的高度相似的遗传图谱和高突变负荷都表明,米托坦抗性这里描述的细胞不是来自预先存在的抗性亚群,而是通过选择诱变产生的。一贯地,先前从 H295R 细胞中分离侧群的努力没有产生抗性细胞。

先前的研究集中在 H295R 细胞对米托坦(Lysodren)的短期反应上,在我们的研究中,这种效应在对照细胞的短期医治中很大阶段上得到了复制。我们的微阵列数据表明参与类固醇激素途径的基因表达下调和未折叠蛋白反应基因的上调,与之前的数据一致。我们研究中差异表达基因的数量较少可能与不同的医治坚持时间有关(Sbiera等人的研究中为 6 小时,而我们的研究中为 18 小时)。

然而,这项研究的重点是米托坦耐受药物性的体外机制。形态学分析表明线粒体损伤是米托坦处置的 H295R 细胞的一个显着特点,在米托坦处置的抗性细胞中不存在。这些发现表明改变的通路位于线粒体损伤的上游。因此,基因表达分析和功能研究都指出了脂蛋白和脂质稳态的变化。通过基因表达微阵列,我们发现与类固醇代谢有关的途径下调,以及对 ERK、凋亡细胞清除和对异生物质的反应的调节,这些共同可能导致耐受药物表型。与基因表达变化相关的拷贝数变化与米托坦讯号传导无关,这表明调节基因表达而不是 CNV 可能起作用。

克服米托坦(Lysodren)耐受药物性的潜在策略包括 SOAT 抑制剂,例如 ATR-101、抑制 ER 伴侣蛋白或蛋白酶体抑制剂。值得注意的是,在我们的模型中,多柔比星在用米托坦处置的耐受药物细胞中比在非耐受药物对照中更有效,这一观察迄今为止仍未得到解释。如果适用于体内,这些结果将支持在米托坦单药医治时间段重复发的情况下使用米托坦加多柔比星(作为 EDP-M 的一部分)。

如前所述,在我们的细胞模型中,通过减少细胞外脂蛋白浓度能够部分逆转米托坦(Lysodren)耐受药物性。这种效果特殊重要,因为米托坦医治可导致脂蛋白水平上升,从而可能促进耐受药物性。已经提出通过他汀类药品医治减少脂蛋白水平与米托坦医治时间段更高的肿瘤控制率有关。新型 PCSK9 抑制剂可能更有希望,因为它们可以在他汀类药品医治之外减少 LDL 水平 。因此,我们建议我们在这里建立的模型可能有助于制定克服体外米托坦耐受药物性的策略,然后能够在临床实验中进一步研究。

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南亚先生
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